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离子交换层析的洗脱离子交换层析的洗脱会受到线性或分步盐梯度或置换展开的影响。一般最好先采用线性的盐梯度洗脱,维持梯度约10个柱体积。在zui简单的情况下,梯度操作需两种缓冲液,平衡缓冲液(bufferA)和用于加载相反电荷离子所用缓冲液(bufferB)。大多数情况下,并不需要后半段的梯度,因为多数蛋白质都可以在150-500nmol/L盐浓度下从传统的离子交换剂上洗脱下来。所以,通常最大梯度到50%足矣。分步洗脱也可通过bufferA和bufferB实现。也应该意识到也许永远都不会获得一种理...
2-15 2022
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地黄中梓醇含量测定参考标准参考标准:中国药典2020版一部色谱条件色谱柱:月旭Ultimate®ODS-3(4.6×250mm,5μm)。流动相:甲醇/0.1%磷酸=1/99;检测波长:210nm;柱温:35℃;流速:1.0mL/min;进样量:10μL。谱图和数据参考标准用月旭Ultimate®ODS-3(4.6×250mm,5μm),在此色谱条件下测定,能满足检测的要求。用月旭Ultimate®ODS-3(4.6×250mm,5μm),在此色谱条件下测定,能满足检测...
2-15 2022
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浅谈离子对色谱法小伙伴们在做日常检测,会发现有些项目,测试标准上使用的流动相中加入了像庚烷磺酸钠、四丁基氢氧化铵、四丁基溴化铵等试剂,这类试剂我们称为离子对试剂,它可以用来改善分离和峰形、缩窄样品的保留范围等。离子对试剂可以看成是在高效液相色谱法中引入了离子色谱方法的一种表现。今天小编和小伙伴们聊聊离子对色谱法的保留基本原理和一些特殊问题。离子对色谱法(IPC)可被看做是以分离离子样品为目标的反相色谱法的改良形式。IPC和RPCwei一不同的条件是IPC在流动相中添加了离子对试剂R+或R-,...
2-15 2022
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板蓝根颗粒含量测定参考标准参考标准:中国药典2020版。色谱条件注:在原条件基础上增加高比例有机相洗脱,以去除后面强保留杂质,以免杂质在后续进样中出峰影响检测,同时也避免杂质峰残留在柱子上影响柱子寿命。谱图和数据结论用月旭Ultimate®AQ-C18(4.6×250mm,5μm),在此色谱条件下测定,能满足检测的要求。用月旭Ultimate®AQ-C18(4.6×250mm,5μm),在此色谱条件下测定,能满足检测的要求。用月旭Ultimate®AQ-C18(4.6×...
2-15 2022
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考马斯亮蓝法测定蛋白质含量考马斯蓝染色法又称Bradford法,是Bradford于1976年建立起来的一种蛋白质浓度的测定方法。考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。实验仪器分析天平、烧杯、玻璃杯、移液枪、紫外分光光度计或酶标仪。实验试剂①标准蛋白溶液:常用牛血清蛋白(BSA),配制1mg/mL的标准溶液。②0.01%考马斯亮蓝染色液G-250:称取0.01g考...
2-7 2022
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茵陈配方颗粒特征图谱和含量的检测茵陈,原名茵陈蒿,始载于《神农本草经》,被列为上品。具有清利湿热,利胆退黄之功效。用于黄疸尿少,湿温暑湿,湿疮瘙痒。文中参照茵陈【滨蒿(绵茵陈)】配方颗粒公示稿的方法,采用月旭Ultimate®UHPLCXB-C18色谱柱进行特片图谱的检测,结果能满足检测需求。采用月旭Ultimate®PlusC18色谱柱进行含量测定项的检测,结果能满足检测需求。特征图谱的测定色谱条件结论用月旭Ultimate®UHPLCXB-C18(2.1×100mm,1.8μm)...
1-30 2022
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拨开迷雾 带你共同解决 固相萃取的常见问题固相萃取法(SPE):又叫液固提取法。它是指液体样品中的分析物通过吸附(吸附和吸收)作用被保留在吸附剂上,然后用一定的溶剂洗脱的过程。固相萃取法是一项结合了选择性保留、选择性洗脱等过程的分离技术。主要用于样品的分离、纯化和浓缩,与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率,更有效的将分析物和干扰组分分离,减少样品预处理过程,操作简单,省时、省力。关于固相萃取柱使用时的一些常见问题,一般会有回收率低、重现性差、净化效果不佳这几大方面,那么都是什么原因导致的呢?又该如何应对?今...
1-30 2022
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空白溶剂干扰怎么办?采用高效液相色谱法检测时,很多时候会需要做空白溶剂干扰实验。当空白溶剂实验显示空白溶剂在待测成分处出峰时,就一定是溶剂带来的干扰吗?如果出现空白溶剂干扰,该怎么办呢?可以从以下几个方面去查找原因并解决。系统污染:这种情况下,将仪器接双通,采用10%异丙醇,低流速过夜冲洗仪器。进样口污染:进样口用水-乙腈-异丙醇-乙腈-水的顺序充分清洗。色谱柱残留:色谱柱在进过高浓度样品后再进低浓度样品色谱柱上会有残留,这种情况可以先多进几针空白溶剂,或将色谱柱用过渡流动相过渡后,用高比例有机...
1-30 2022